1、營養物質的維持。

　　當微生物在濕熱滅菌中被殺死時，培養基的營養成分也受到一定程度的破壞，尤其是氨基酸和維生素。比如在121℃下僅20分鐘，59%的賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸被破壞，還有相當數量的蛋氨酸和色氨酸也被破壞。在熱量的作用下，一些營養物質可能會因熱量而相互反應，導致培養基中原有的營養物質發生變化，從而影響培養基的質量。

　　2.微生物的耐熱性。

　　細菌孢子熱阻大，滅菌所需時間取決于將細菌孢子減少到規定數量所需的時間。

　　3.pH值。

　　pH值對微生物的耐熱性影響很大。當pH值在6.0-8.0之間時，微生物死亡的可能性最小。pH<6.0時，微生物容易死亡。此時H+很容易滲入微生物細胞，從而改變細胞的生理反應，促進細胞死亡。因此，培養基的酸堿度越低，所需的時間越短。

　　4.培養基的組成。

　　由油、糖和蛋白質組成的高濃度有機物會在細胞周圍形成一層薄膜，影響熱傳導。然而，鹽和色素的高濃度削弱了其耐熱性，使殺菌更容易。例如，大腸桿菌在水中加熱到60-65℃時死亡，在10%糖溶液中70℃加熱4-6分鐘，在30%糖溶液中加熱30分鐘。一般在含糖量高的時候，11111111選擇115°C30分鐘；一般培養基可在121℃下選擇20分鐘。

　　5.泡沫。

　　泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進去，殺死雜菌。

　　6.顆粒。

　　小顆粒容易殺菌，大顆粒難殺菌。含有少量較大顆粒和粗纖維的介質可以通過粗過濾去除(這不應影響介質的質量)。培養基的結塊會導致培養基滅菌不完全。

　　8.滅菌鍋內的空氣是否排出。

　　這是影響殺菌的關鍵點，也就是溫度和壓力的比例關系。同樣的壓力下，如果空氣沒有排出，也就是說不是純蒸汽滅菌，此時的溫度可能達不到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。