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    培養基的質量控制4

    2021-05-22

      4培養基的使用


      4.1瓊脂培養基的融化


      將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間,避免過度加熱。培養基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min),以免玻璃容器發生破裂。


      融化后的培養基放人47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫,冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于培養基的類型、體積和在水在鍋里的分裝量。融化后的培養基應盡快使用,放置時間一般不超過4h。剩余的培養基凝固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基,應根據相關標準,縮短融化后放置的時間。


      將瓊脂培養基倒人類似檢測培養基使用的獨立容器中,插入溫度計,記錄并保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養基應將溫度調節到44℃~47℃,或按照相關標準調節溫度。


      4.2培養基的脫氣


      必要時,在使用前將培養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min,加熱時松開容器蓋子;加熱后蓋緊蓋子,并迅速冷卻至使用溫度。


      4.3添加成分的加入


      對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時加人。滅菌的添加成分加入前應冷卻至室溫,避免冷的液體會造成瓊脂凝膠或形成片狀物。將添加成分緩慢加入培養基并充分棍勻,盡快分裝到待用的容器中。


      4.4平板的制備和儲存


      傾注融化后的培養基到平皿中,使之在乎皿中形成一個至少3mm厚度的瓊脂層(直徑90mm的平皿通常要加入18mL~20mL瓊脂培養基),或根據相關標準要求制備平皿。將平皿蓋好皿蓋后放置在水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板要儲存、培養時間超過48h或培養溫度超過40℃,要增加培養基的傾注量。


      注:在培養過程中,瓊脂培養基會損失水分,在某些環撓條件下會影響微生物的生長。造成培養基水分損失的因素很多,如培養基的成分、平皿中培養基的量、培養箱的類型(如使用帶鳳扇的培養箱)、培養箱里的空氣濕度、平皿在培養箱中放置的位置和數量以及培養溫度等。


      凝固后的培養基應立即使用或存放在防止其成分發生變化的條件下,如存放于暗處和(或)5℃±3℃冰箱的密封袋中(見4.2)。在平板的底部或側面做好標記,標記的內容包括培養基名稱、制備日期和(或)有效期。也可使用適宜的培養基編碼系統進行標記。


      將傾注好的平板放在密封袋中冷藏可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生,平板應冷卻后再裝人密封袋中。貯存前不要對培養基表面進行干燥處理。


      對于采用表面接種的固體培養基,應先對瓊脂表面進行干燥:揭開平皿蓋,將平板倒扣于烘箱/培養箱中(溫度設置為25℃~50℃);或放在有對流風的無菌凈化臺中,直到培養基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商業化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。


      4.5培養基的棄置


      所有污染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式,并符合相關法律法規的規定。


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