4培養基的使用

　　4.1瓊脂培養基的融化

　　將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間，避免過度加熱。培養基融化后立即移開，室溫靜置片刻（約2min)，以免玻璃容器發生破裂。

　　融化后的培養基放人47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于培養基的類型、體積和在水在鍋里的分裝量。融化后的培養基應盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩余的培養基凝固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基，應根據相關標準，縮短融化后放置的時間。

　　將瓊脂培養基倒人類似檢測培養基使用的獨立容器中，插入溫度計，記錄并保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養基應將溫度調節到44℃~47℃，或按照相關標準調節溫度。

　　4.2培養基的脫氣

　　必要時，在使用前將培養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min，加熱時松開容器蓋子；加熱后蓋緊蓋子，并迅速冷卻至使用溫度。

　　4.3添加成分的加入

　　對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時加人。滅菌的添加成分加入前應冷卻至室溫，避免冷的液體會造成瓊脂凝膠或形成片狀物。將添加成分緩慢加入培養基并充分棍勻，盡快分裝到待用的容器中。

　　4.4平板的制備和儲存

　　傾注融化后的培養基到平皿中，使之在乎皿中形成一個至少3mm厚度的瓊脂層（直徑90mm的平皿通常要加入18mL~20mL瓊脂培養基），或根據相關標準要求制備平皿。將平皿蓋好皿蓋后放置在水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板要儲存、培養時間超過48h或培養溫度超過40℃，要增加培養基的傾注量。

　　注：在培養過程中，瓊脂培養基會損失水分，在某些環撓條件下會影響微生物的生長。造成培養基水分損失的因素很多，如培養基的成分、平皿中培養基的量、培養箱的類型（如使用帶鳳扇的培養箱）、培養箱里的空氣濕度、平皿在培養箱中放置的位置和數量以及培養溫度等。

　　凝固后的培養基應立即使用或存放在防止其成分發生變化的條件下，如存放于暗處和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中（見4.2）。在平板的底部或側面做好標記，標記的內容包括培養基名稱、制備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養基編碼系統進行標記。

　　將傾注好的平板放在密封袋中冷藏可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生，平板應冷卻后再裝人密封袋中。貯存前不要對培養基表面進行干燥處理。

　　對于采用表面接種的固體培養基，應先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣于烘箱／培養箱中（溫度設置為25℃~50℃）；或放在有對流風的無菌凈化臺中，直到培養基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商業化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。

　　4.5培養基的棄置

　　所有污染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式，并符合相關法律法規的規定。